Модифицированный метод определения иммуногенности

KARL HABEL

Для многих лабораторий повседневное применение метода Habel оказывается недоступным из-за недостатка животных, которые нужны для этого в сравнительно большом количестве. Это особенно относится к тем лабораториям, которым приходится часто готовить небольшие партии вакцины. Для таких лабораторий желательно иметь упрощенный метод, позволяющий отбраковывать вакцины, иммуногенная активность которых ниже стандартной. Вместе с тем он должен отвечать требованиям, предъявляемым к стандартным методам.

При анализе результатов многочисленных испытаний на иммуногенность, проводимых с вакцинами высокой, низкой и средней антигенности, оказалось, что если по данным полного стандартного теста иммуногенность вакцины превышает 1000 LD₅₀ защиты (что считается минимальным требованием), то 500 LD₅₀ суспензии вируса при интрацеребральном заражении убивает менее половины иммунизированных мышей.

Методика проведения этого теста не отличается от стандартной внутрибрюшинно вводят 6 доз 0,5% суспензии нервной ткани (0,25 мл), а на 14-й день производят интрацеребральное разрешающее заражение; затем следует наблюдение в течение 14 дней. Иммунизируют всего 20 мышей; 15 мышей держат для контроля. На 14-й день стандартный вирус разводят так, чтобы 0,03 мл суспензии содержали 500 LD₅₀, и вводят интрацеребралыю вакцинированным мышам. Одновременно группам контрольных мышей в 5 животных в каждой вводят разрешающий вирус, разведенный до 10:5, 10:6 и 10:7 где описана аналогичная процедура)

Для того, чтобы результаты испытания были достоверными, вакцинированным мышам надо вводить разрешающую дозу от 100 до 1000 LD₅₀ (по данным контрольного титрования), чтобы можно было считать вакцину эффективной, должно выжить 50% вакцинированных мышей.

Рекомендуется через определенные интервалы ставить полный стандартный тест на иммуногенность для получения более точной оценки вакцины, выпускаемой на протяжении длительного времени данной лабораторией.

Эталонная вакцина

Национальные институты здравоохранения рассылают всем лабораториям США, выпускающим вакцины, эталонную антирабическую вакцину (инактивированную ультрафиолетовыми лучами и лиофилизированную) При разведении содержимого ампулы в 8 мл дистиллированой воды получают 10% суспензию. Сухую вакцину хранят при 2—10° и переводят в жидкую форму лишь непосредственно перед использованием.

Иммунизация мышей

Из вакцины, подлежащей испытанию, готовят 3 или более разведений с 5-кратными интервалами в буферном физиологическом растворе (0,85% NaCl в фосфатном буфере, pH 7,6) Диапазон разведений подбирают так, чтобы среднее из них обеспечивало защиту 50% мышей. Диапазон зависит, от дозы вируса, используемого для испытания иммунитета, линии мышей и иммуногенности вакцины. При диапазоне дозы 5—50 LD₅₀ целесообразно использовать диапазон разведений 0,1; 0,2 и 0,04% как при работе с эталонной вакциной, так и при использовании коммерческих вакцин, выпускаемых в США.

0,5 мл каждого разведения вводят внутрибрюшинно 16 мышам в возрасте 4 недель, весом 11—15 г. Каждому животному вводят 2 дозы с интервалом в 1 неделю. При введении каждой дозы следует открывать новую ампулу эталонной в-ны. В момент введения первой дозы устанавливают наблюдение над содержащейся отдельно контрольной группой животных, что необходимо для последующего титрования вируса. Контрольная группа должна состоять из 30—40 животных (по 10 мышей на каждое разведение вируса).

Мышей вакцинируют внутрибрюшинно (0,5 мл), пользуясь иглой размером 0,50X12 или 18 мм. Вводить вакцину следует быстро. Если есть сомнение в том, что игла проникла в брюшную полость, надо подвигать кончиком иглы из стороны в сторону и понаблюдать за кожей.

Если для введения вакцины пользуются одним из тем же шприцем или иглой, то начинать введение надо с максимального разведения, переходя затем к более концентрированной вакцине. Если не произведена строгая маркировка мышей, то животных, получивших одно разведение, надо держать отдельно от мышей, получивших другое разведение.

Опубликовано 14.09.2012